Антитела к эндотелиальным клеткам (huvec)

дальнейшее чтение

• Goon, PKY, Lip, GYH, Boos, CJ, Stonelake, PS, Blann, AD (2006) Циркулирующие эндотелиальные клетки, эндотелиальные клетки-предшественники и эндотелиальные микрочастицы при раке. Неоплазия. 8: 79-88
• Koc, M., Rochards, HB, Bihorac, A., Ross, EA, Schold, JD, Segal, MS (2005) Циркулирующие эндотелиальные клетки связаны с будущими сосудистыми событиями у пациентов, находящихся на гемодиализе. Kidney International. 67: 1078-1083
• Бетел, К., Лутген, М.С., Дамани, С., Колаткар, А., Лами, Р., Сабури-Гоми, М., Тополь, С., Тополь, Э.Дж., Кун, П. (2014) Биопсия жидкой фазы для обнаружения и характеристики циркулирующих эндотелиальных клеток при инфаркте миокарда. Физическая биология. 11: 016002
• Damani, S., et al. (2012) Характеристика циркулирующих эндотелиальных клеток при остром инфаркте миокарда. Научная трансляционная медицина. 4: 1-9
• Мартинес-Салес, В., Санчес-Лазаро, И., Вила, В., Альменар, Л., Контрерас, Т., Реганон, Е. (2011) Циркулирующие эндотелиальные клетки у пациентов с сердечной недостаточностью и слева желудочковая дисфункция. Маркеры заболеваний. 31: 75-82
• Woywodt, A., Bahlmann, FH, de Groot, K., Haller, H., Haubitz, M. (2002) Циркулирующие эндотелиальные клетки: жизнь, смерть, отслоение и восстановление слоя эндотелиальных клеток. Пересадка нефрола Dial. 17: 1728-1730
• Boos, CJ, Lip, GY и Blann, AD (2006) Циркулирующие эндотелиальные клетки при сердечно-сосудистых заболеваниях. Варенье. Coll. Кардиол. 48: 1538–1547
• Хилл, Дж. М., Залос, Г., Халкокс, Дж. П., Шенке, WH, Ваклавив, М. А., Куиюми, А. А., и Финкель, Т. (2003). Циркулирующие эндотелиальные клетки-предшественники, функция сосудов и сердечно-сосудистый риск. Медицинский журнал Новой Англии. 348: 593-600.
• Вернер, Н., Косиол, С., Шигль, Т., Алерс, П., Валента, К., Линк, А., … и Никениг, Г. (2005). Циркулирующие эндотелиальные клетки-предшественники и сердечно-сосудистые исходы. Медицинский журнал Новой Англии. 353: 999-1007.
• Blann, AD, Woywodt, A., Bertolini, F., Bull, TM, Buyon, JP, Clancy, RM, … & Dignat-George, F. (2005). Циркулирующие эндотелиальные клетки. Биомаркер сосудистых заболеваний. Thromb Haemost. 93: 228-235.
• Джордж, Ф., Бриссон, К., Понселе, П., Лоран, Дж. К., Массо, О., Арну, Д., Амбрози, П., Кляйн-Сойер, К., Казенав, Дж. П., Сампол, Дж. ( 1992) Быстрое выделение эндотелиальных клеток человека из цельной крови с использованием моноклонального антитела S-Endo 1, связанного с иммуномагнитными шариками: демонстрация повреждения эндотелия после ангиопластики. Thromb Haemost. 67: 147–153.
• Дэвис, MJ, и Thomas, AC (1985). Растрескивание бляшки — причина острого инфаркта миокарда, внезапной ишемической смерти и нарастающей стенокардии. Британский журнал сердца. 53: 363.
• Ли, К., Ву, К., Лю, Б., Яо, Ю., Чен, Ю., Чжан, Х., и Ге, С. (2013). Обнаружение и проверка циркулирующих эндотелиальных клеток, диагностического маркера острого инфаркта миокарда на основе крови. PLoS ONE, 8: e58478.
• Бувье, Калифорния, Гейнор, Э., Клинтрон, Дж. Р. и др. (1970) Циркулирующий эндотелий как индикатор сосудистого повреждения. Thromb Diath Haemorrh. 40: 163-168
• Мутин, М., Канави, И., Бланн, А., Бори, М., Сампол, Дж., И Дигнат-Джордж, Ф. (1999). Прямое доказательство повреждения эндотелия при остром инфаркте миокарда и нестабильной стенокардии путем демонстрации циркулирующих эндотелиальных клеток. Кровь 93: 2951-2958.
• Тайгесен, К., Альперт, Дж. С., и Уайт, HD (2007). Универсальное определение инфаркта миокарда. Журнал Американского колледжа кардиологии. 50: 2173-2195.
• Люшер, Т.Ф. (1993). Эндотелий как мишень и медиатор сердечно-сосудистых заболеваний. Европейский журнал клинических исследований. 23: 670-685.
• Ип, Дж. Х., Фустер, В., Бадимон, Л., Бадимон, Дж., Таубман, МБ, и Чезебро, Дж. Х (1990). Синдромы ускоренного атеросклероза: роль повреждения сосудов и пролиферации гладкомышечных клеток. Журнал Американского колледжа кардиологии. 15: 1667-1687.

Функция эндотелия

Возможно, вы слышали, что кровь описывается как «река тела», по которой передаются сообщения и запасы между клетками и органами.

То, что вы не могли бы понять, что эта река должна быть жестко регулируется. Нельзя допустить, чтобы он был слишком низким или слишком высоким, и необходимо принимать решения о том, какие материалы и сообщения отправляются вместе с ним.

Функционирование всего организма зависит от этого, поскольку клетки и органы могут функционировать, только если их потребности удовлетворены и если они получают правильные сообщения через кровь.

Эндотелий может выглядеть не очень, если вы посмотрите на него во время вскрытия или под микроскопом. Он выравнивает кровеносные сосуды и выглядит как целлофановая полиэтиленовая пленка.

Но на молекулярном уровне эпителий выполняет много важных задач, которые жизненно важны для поддержания здоровья нашего тела.

Некоторые из этих задач:

• Мониторинг и контроль выброса электролитов и воды в кровь.
• Контроль артериального давления путем расслабления или сокращения в ответ на гормональные и нервные сигналы.
• Предотвращает свертывание крови внутри сосудов. Клетки на самом деле содержат и высвобождают анти-свертывающие факторы по мере необходимости!
• Селективная проницаемость – он хранит вещи, которые не должны быть в крови, в то время как он хранит вещи, которые должны быть в крови внутри сосудов. Эндотелий, например, пропускает лейкоциты между тканями и кровеносными сосудами, но не бактерии,
• Рост и ремонт кровеносных сосудов.
• Иммунные и воспалительные реакции.

«Эндотелиальная дисфункция» – когда ваш эндотелий не выполняет некоторые из этих работ должным образом – может быть симптомом и причиной многих заболеваний.

Эндотелиальная дисфункция может играть роль в повышенном кровяном давлении, если эндотелиальные клетки не высвобождают надлежащие антисвертывающие факторы. Эндотелиальные проблемы могут также привести к воспалительным иммунным реакциям, которые повреждают органы, и образованию сгустков крови в артериях.

Врачи часто видят эндотелиальную дисфункцию у людей с сердечно-сосудистыми заболеваниями, диабетом, высоким кровяным давлением, людьми с высоким уровнем холестерина и людьми, которые курят.

Классификации

С помощью метода выделения и функции клеток были описаны три основные популяции предполагаемых взрослых EPC. Поведение ячеек можно найти в следующей таблице.

EPC также имеют вариабельные фенотипические маркеры, используемые для идентификации. К сожалению, не существует уникальных маркеров для эндотелиальных предшественников, которые не были бы общими с другими эндотелиальными или гематопоэтическими клетками, что внесло свой вклад в историческую полемику вокруг этой области. Подробный обзор текущих маркеров можно найти в следующей таблице.

Колониеобразующая единица — Хилл

Как первоначально было выделено Asahara et al., Популяция CFU-Hill представляет собой ранний отросток, образованный путем высевания мононуклеарных клеток периферической крови на чашки, покрытые фибронектином, что обеспечивает адгезию и истощение неприлипающих клеток и выделение отдельных колоний.

Циркулирующая ангиогенная клетка

Аналогичный метод заключается в культивировании мононуклеарной фракции периферической крови в среде для роста эндотелия с добавками, удалении неприлипающих клеток и изоляции оставшихся. Хотя эти клетки обладают некоторыми характеристиками эндотелия, они не образуют колоний.

Эндотелиальная колониеобразующая клетка

Эндотелиальные колониеобразующие клетки представляют собой клетки позднего отростка; то есть они выделяются только после значительно более длительного культивирования, чем клетки CFU-Hill. ECFC выделяют путем высевания мононуклеарной фракции периферической крови на покрытые коллагеном пластин, удаления неприлипающих клеток и культивирования в течение недель до появления колоний с характерной морфологией булыжника. Эти клетки фенотипически сходны с эндотелиальными клетками и, как было показано, создают сосудоподобные структуры in vitro и in vivo.

Выражение

Продукция VEGF-A может быть индуцирована в клетке, которая не получает достаточно кислорода . Когда клетке не хватает кислорода, она вырабатывает HIF, фактор , индуцируемый гипоксией, фактор транскрипции. HIF стимулирует высвобождение VEGF-A, помимо других функций (включая модуляцию эритропоэза). Циркулирующий VEGF-A затем связывается с рецепторами VEGF на эндотелиальных клетках, запуская тирозинкиназный путь, ведущий к ангиогенезу. Экспрессия ангиопоэтина-2 в отсутствие VEGF приводит к гибели эндотелиальных клеток и регрессии сосудов. Напротив, немецкое исследование, проведенное in vivo, показало, что концентрации VEGF фактически снизились после 25% снижения потребления кислорода в течение 30 минут. HIF1 альфа и HIF1 бета производятся постоянно, но HIF1 альфа очень лабильна к O ₂ , поэтому в аэробных условиях он разлагается. Когда клетка становится гипоксической, HIF1 альфа сохраняется, а комплекс HIF1альфа / бета стимулирует высвобождение VEGF. комбинированное использование микровезикул и 5-FU привело к повышенной химиочувствительности клеток плоскоклеточного рака в большей степени, чем использование только 5-FU или микровезикул. Кроме того, подавление экспрессии гена VEGF было связано со снижением экспрессии гена CD1.

АНГИОЦЕНТРИЧЕСКОЕ ВОСПАЛЕНИЕ

Фигура 1.Лимфоцитарное воспаление в легких у пациента, умершего от Covid-19.

Все образцы легкого из группы Covid-19 имели диффузное альвеолярное повреждение с некрозом клеток альвеолярной оболочки, гиперплазией пневмоцитов 2 типа и линейным внутриальвеолярным отложением фибрина ( рис. 1 ). В четырех из семи случаев изменения были очаговыми, только с легким интерстициальным отеком. Оставшиеся три случая имели гомогенные отложения фибрина и выраженный интерстициальный отек с ранней внутриальвеолярной организацией. Образцы в группе гриппа имели диффузное диффузное альвеолярное повреждение с массивным интерстициальным отеком и обширным отложением фибрина во всех случаях. Кроме того, три образца в группе гриппа имели очаговую организацию и резорбтивное воспаление (рис. S2). Эти изменения были отражены в значительно более высоком весе легких от пациентов с гриппом.

Иммуногистохимический анализ экспрессии ангиотензинпревращающего фермента 2 (ACE2), измеренный как среднее (± SD) относительное количество ACE2-положительных клеток на поле зрения, в неинфицированных контрольных легких показал недостаточную экспрессию ACE2 в альвеолярных эпителиальных клетках (0,053 ± 0,03) и капиллярные эндотелиальные клетки (0,066 ± 0,03). В легких пациентов с Covid-19 и легких пациентов с гриппом относительные количества ACE2-позитивных клеток на поле зрения составляли 0,25 ± 0,14 и 0,35 ± 0,15 соответственно для альвеолярных эпителиальных клеток и 0,49 ± 0,28 и 0,55 ± 0,11. соответственно для эндотелиальных клеток. Кроме того, ACE2-позитивные лимфоциты не были обнаружены в периваскулярной ткани или в альвеолах контрольных легких, но присутствовали в легких в группе Covid-19 и в группе гриппа (относительные значения 0,22 ± 0,18 и 0,15 ± 0,09 соответственно) ,

В легких пациентов с Covid-19 и пациентов с гриппом аналогичные средние (± SD) количества CD3-позитивных Т-клеток были обнаружены в радиусе 200 мкм от предкапиллярных и посткапиллярных стенок сосудов в 20 областях исследования на пациента (26,2 ± 13,1 для Covid-19 и 14,8 ± 10,8 для гриппа). При том же размере поля, использованном для исследования, CD4-позитивные Т-клетки были более многочисленными в легких от пациентов с Covid-19, чем в легких от пациентов с гриппом (13,6 ± 6,0 против 5,8 ± 2,5, P = 0,04), тогда как CD8- положительные Т-клетки были менее многочисленными (5,3 ± 4,3 против 11,6 ± 4,9, р = 0,008). Нейтрофилы (CD15-положительные) были значительно менее многочисленными, прилегающими к альвеолярной эпителиальной оболочке в группе Covid-19, чем в группе гриппа (0,4 ± 0,5 против 4,8 ± 5,2, P = 0,002).

Мультиплексный анализ экспрессии генов, связанных с воспалением, с исследованием 249 генов из nCounter Inflammation Panel (NanoString Technologies) выявил сходства и различия между образцами в группе Covid-19 и в группе гриппа. В общей сложности 79 генов, связанных с воспалением, были дифференциально отрегулированы только в образцах от пациентов с Covid-19, тогда как 2 гена были дифференциально отрегулированы только в образцах от пациентов с гриппом; общий ген экспрессии был обнаружен для 7 генов (рис. S1).

Описание

Антитела к эндотелиальным клеткам (HUVEC) — данное исследование используется для выявления антител при системных васкулитах и васкулопатиях.
Антиэндотелиальные антитела (АЭТА) составляют гетерогенную группу антител, направленных к антигенным детерминантам эндотелиальных клеток. Точная природа антигенов не установлена, кроме того, некоторые антигены аутоантител могут являться компонентами плазмы крови, адсорбированными на поверхности эндотелиоцитов. Антиэндотелиальные антитела перекрестно реагируют с антителами к кардиолипину классов IgG и IgM (01.02.15.145) и антителами к тромбоцитам.
Антитела к эндотелию были обнаружены при многих первичных васкулитах и васкулопатиях. Сравнительно часто они отмечаются при болезни Кавасаки, аортоартерите Такаясу, гранулематозных васкулитах, пурпуре Шенлейн-Геноха, и вторичных васкулопатиях, в частности, облитерирующем тромбангиите (болезни Бюргера), гемолитической тромбоцитопенической пурпуре, антифосфолипидном синдроме. Антиэндотелиальные антитела связаны с активностью ряда васкулитов и васкулопатий, в том числе АНЦА-ассоциированных васкулитов, в частности болезни Кавасаки, облитерирующем тромбангиите. При синдроме Бехчета они встречаются у 50% больных, особенно у больных с выраженным кожным васкулитом. Целесообразность детекции этой разновидности аутоантител в клинике определяется их появлением на фоне выраженной клинической активности заболевания, что позволяет ориентироваться на их содержание для определения фазы заболевания. Они могут играть определенную роль в патогенезе васкулитов, в связи с тем, что способны модулировать экспрессию эндотелиальных молекул адгезии и факторов воспаления. АЭТА, обнаруженные в сыворотке больных СКВ, способны усиливать высвобождение IL-6 из эндотелиоцитов, таким образом, участвуя в патогенезе системной воспалительной реакции.
Критерии для определения АЭТА в клинике окончательно не разработаны. Антитела к эндотелию могут служить неспецифическим маркёром ангиопатий различного генеза, и мониторинг их содержания в сыворотке крови больного с течением времени позволяет установить активность патологического процесса, поражающего сосуды.Показания:

• диагностика системных васкулитов крупных сосудов;
• диагностика васкулитов и васкулопатий на фоне системных ревматических заболеваний;
• динамическое наблюдение за васкулитами и васкулопатиями различного генеза.

Подготовка
Кровь рекомендуется сдавать утром, в период с 8 до 12 часов. Взятие крови производится натощак или спустя 4–6 часов после последнего приема пищи. Допускается употребление воды без газа и сахара. Накануне сдачи исследования следует избегать пищевых перегрузок.Интерпретация результатов
Единицы измерения: титр
Референсные значения: <1:40, отрицательно
Обнаружение высоких титров антител к эндотелию указывает на высокую активность воспалительного процесса при системных васкулитах крупных сосудов, прежде всего болезни Кавасаки, аортоартерите Такаясу и височном артериите. Антитела к эндотелию отмечаются у большинства больных с активной формой АНЦА-ассоциированных васкулитов. У детей с пурпурой Шенлейн-Геноха наличие АЭТА класса IgA коррелирует с частотой поражения почек. Антитела могут отражать активность процесса при облитерирующем тромбангиите. При синдроме Бехчета они встречаются у 30–50% больных, особенно у больных с выраженным кожным васкулитом.

Примеры эндотелия

Подкладка артерий и вен

Артерии и вены являются основными кровеносными сосудами нашего тела. Артерии являются «быстрым переулком», перекачивая огромные объемы крови при высоком давлении, чтобы снабжать наши органы кислородом, в котором они нуждаются; вены – это медленная «обратная дорога», где кровь возвращается к сердцу после того, как кислород израсходован.

Есть некоторые важные различия между артериями и венами. Артерии имеют толстые, мускулистые стенки, которые обеспечивают их насосное действие; они также расположены глубоко под кожа, чтобы избежать травм. Вены, с другой стороны, имеют более тонкие стенки и расположены близко к коже, потому что травма вены не так катастрофична.

Несмотря на их различия, оба имеют эндотелиальные накладки, которые контролируют и регулируют химический состав крови. Эндотелиальные клетки, например, могут отвечать за «приказ» артериям сокращаться или расслабляться в зависимости от потребностей организма. Они также контролируют выброс воды, электролитов и других веществ в кровь.

Эндокард

«Эндокард» – это эпителиальная оболочка сердца. Его название буквально происходит от греческих слов «внутри» и «сердце». Он играет все те же важные роли в сердце, что и другие области эндотелия; но это имеет особое значение, так как защищает орган это делает возможной оставшуюся жизнь тела.

Ученые считают, что эндокард контролирует поток веществ между кровью и сердцем, предотвращая повреждение этого жизненно важного органа такими вредными веществами, как бактерии из крови

Клубочки почек

Эндотелиальные клетки, которые помогают почкам фильтровать кровь, также играют уникальную роль. Поскольку работа почек заключается в том, чтобы выпускать продукты жизнедеятельности из крови, эти клетки позволяют воде, солям и белкам свободно проходить из крови в систему сбора мочи.

Это на самом деле, почему пить много воды или соли может увеличить выработку мочи. Чем больше воды или соли в нашей крови, тем больше проходит через эндотелий в систему сбора мочи.

Функция

Роль в росте опухоли

Эндотелиальные клетки-предшественники, вероятно, играют важную роль в росте опухоли и считаются критическими для метастазирования и ангиогенеза. Было проведено большое количество исследований предполагаемых EPC, полученных из костного мозга CFU-Hill. Удаление эндотелиальных клеток-предшественников в костном мозге приводит к значительному снижению роста опухоли и развития сосудистой сети. Это указывает на то, что эндотелиальные клетки-предшественники представляют собой новые терапевтические мишени. Ингибитор связывания ДНК 1 ( ID1 ) был использован в качестве маркера для этих клеток; это позволяет отслеживать EPC от костного мозга до крови, стромы опухоли и даже их включения в сосудистую сеть опухоли.

Недавно было обнаружено, что miRNA регулируют биологию EPC и ангиогенез опухоли. Эта работа Plummer et al. обнаружили, что, в частности, нацеливание на miRNA miR-10b и miR-196b приводит к значительным дефектам в опосредованном ангиогенезом росте опухоли за счет уменьшения мобилизации проангиогенных EPC в опухоль. Эти находки показывают, что направленное нацеливание на эти miRNAs в EPC может привести к новой стратегии ингибирования ангиогенеза опухоли.

Исследования показали, что ECFC и эндотелиальные клетки пупочной вены человека (HUVEC) обладают способностью к миграции опухоли и неоангиогенезу даже большей, чем у других CD34 + гематопоэтических клеток при имплантации иммунодефицитным мышам, что позволяет предположить, что эндотелиальные предшественники играют ключевую роль, но дополнительно поддерживают важность обоих типов клеток как мишеней для фармакологической терапии.

Роль в сердечно-сосудистых заболеваниях

Более высокие уровни циркулирующих «эндотелиальных клеток-предшественников» были обнаружены в кровотоке пациентов, что предсказывало лучшие результаты, и у пациентов было меньше повторных сердечных приступов, хотя статистические корреляции между этими результатами и количеством циркулирующих эндотелиальных клеток-предшественников были скудными в первоначальном исследовании. Эндотелиальные клетки-предшественники мобилизуются после инфаркта миокарда и функционируют для восстановления внутренней оболочки кровеносных сосудов, поврежденных во время сердечного приступа.

В ряде небольших фазовых клинических испытаний начали указывать на EPC как на потенциальное средство лечения различных сердечно-сосудистых заболеваний (ССЗ). Например, в течение года «Трансплантация клеток-предшественников и усиление регенерации при остром инфаркте миокарда» (TOPCARE-AMI) изучали терапевтический эффект инфузии расширенных ex-vivo EPC костного мозга и EPC, обогащенных культурой, полученных из периферической крови, 20 пациентам, страдающим от острый инфаркт миокарда (ИМ). Через четыре месяца было обнаружено значительное улучшение фракции выброса желудочков, геометрии сердца, резерва коронарного кровотока и жизнеспособности миокарда (Shantsila, Watson, & Lip). В аналогичном исследовании изучалось терапевтическое действие EPC на ишемию ног, вызванную тяжелым заболеванием периферических артерий. В ходе исследования в икроножные мышцы 25 пациентов был введен образец крови, богатой EPC. Через 24 недели наблюдалось увеличение количества коллатеральных сосудов и улучшение перфузии крови. Также было отмечено уменьшение боли в покое и безболезненной ходьбы.

Роль в заживлении ран

Роль эндотелиальных клеток-предшественников в заживлении ран остается неясной

Было замечено, что кровеносные сосуды входят в ишемическую ткань в процессе, вызванном механически принудительным проникновением существующих капилляров в бессосудистую область и, что важно, вместо прорастания ангиогенеза. Эти наблюдения противоречат ангиогенезу прорастания, управляемому EPCs

В сочетании с невозможностью найти эндотелий, полученный из костного мозга, в новой сосудистой сети, в настоящее время существует мало материальной поддержки постнатального васкулогенеза. Напротив, ангиогенез, вероятно, управляется процессом физической силы.

Роль в эндометриозе

При эндометриозе до 37% эндотелия микрососудов эктопической ткани эндометрия происходит из эндотелиальных клеток-предшественников.