Серологический анализ

Серологические методы исследования

В лабораторной практике серологическое исследование крови является дополнительным к бактериологическому исследованию. Основные методы представлены:

1. Реакцией флюоресценции, которая проводится в два этапа. Сначала выявляются антитела в циркулирующем комплексе антиген. Затем на контрольный образец наносится антисыворотка, с последующим инкубированием препаратов. РИФ применяется для быстрого обнаружения возбудителя заболевания в исследуемом материале. Результаты реакций оцениваются с помощью люминесцентного микроскопа. Оценивается характер свечения, форма, размер объектов.

2. Реакцией агглютинации, которая представляет собой простую реакцию склеивания дискретных антигенов при помощи антител. Выделяют:

— прямые реакции, использующиеся для обнаружения антител в сыворотке крови больного. Определенное количество убитых микробов добавляется к сыворотке и вызывает образование осадка в виде хлопьев. Серологические исследования на брюшной тиф подразумевают проведение именно прямой реакции агглютинации;

— реакции пассивной гемагглютонации, основанные на возможности эритроцитов адсорбировать антиген на своей поверхности и вызывать склеивание при его контакте с антителом, и выпадение видимого осадка. Применяется в процессе диагностики инфекционных заболеваний для выявления повышенной чувствительности к определенным препаратам. При оценивании результатов учитывается внешний вид осадка. Осадок в виде кольца на дне пробирки свидетельствует об отрицательной реакции. Кружевной осадок с неровными краями говорит о наличии той или иной инфекции.

3. Иммуноферментным анализом, в основе которого лежит принцип присоединения ферментной метки к антителам. Это позволяет увидеть результат реакции по появлению ферментной активности или по изменению ее уровня. Этот метод исследования имеет ряд преимуществ:

— используемые реагенты — универсальны, и они стабильны на протяжении полугода;

— процесс учета результатов анализа автоматизирован.

Выше перечисленные серологические методы исследования имеют некоторые преимущества перед бактериологическим методом. Эти методы позволяют определить антигены возбудителей за несколько минут или часов. Более того, эти исследования могут выявлять антигены возбудителя даже после проведения лечения и гибели бактерий, вызывающих его.

Серологический анализ: расшифровка

Серологическое исследование крови – анализ, который позволяет определить/подтвердить тип возбудителя инфекции, помогает специалисту поставить диагноз. Это незаменимая помощь, если врач не может подобрать лекарственную терапию, так как возбудители различных заболеваний отличаются разной чувствительностью к действию конкретных лекарств и антибиотиков.

После того, как процедура сбора материала закончена, лаборанты приступают к следующему этапу – расшифровывают показатели. Так, если в крови у пациента антитела не обнаружены, можно делать вывод, что в организме нет инфекций – результат анализа в таком случае положительный.

Но такое положение вещей, скорее, исключение из правил: если есть симптомы заболевания, серологические исследования выявляют и доказывают наличие серьезной патологии в организме.

Сначала в организме с помощью анализа находят возбудителей заболеваний, далее оценивают количество антител, на основании чего делают вывод о том, насколько серьезно развита инфекция.

Серологические исследования

В исследовательском документе 2016 года Меткалфа и др., Среди которых были Нил Фергюсон и Джереми Фаррар , говорится, что серологические обследования часто используются эпидемиологами для определения распространенности заболевания в популяции. Такие опросы иногда проводятся путем случайного анонимного отбора проб из проб, взятых для других медицинских тестов, или для оценки распространенности антител конкретного организма или защитного титра антител в популяции. Серологические исследования обычно используются для количественной оценки доли людей или животных в популяции, положительной на конкретное антитело, или титра или концентрации антитела. Эти опросы потенциально являются наиболее прямым и информативным доступным методом для определения динамики восприимчивости населения и уровня иммунитета. Авторы предложили Всемирный банк серология (или сывороточный банк) и предвидели «связаны основные методологические разработки в серологического тестирования, дизайн исследования и количественного анализа , которые могли бы вбивать шаг изменения в нашем понимании и оптимального управления от инфекционных заболеваний .»

В полезном ответе, озаглавленном «Возможности и проблемы Всемирного банка сывороток», де Лузиньян и Корреа отметили, что

В другом полезном ответе на Всемирный банк сывороток австралийский исследователь Карен Коутс заявила, что:

В апреле 2020 года Джастин Трюдо сформировал Целевую группу по иммунитету от COVID-19, в задачу которой входит проведение серологического исследования по схеме, разработанной в разгар пандемии COVID-19 .

Сравнительная характеристика и использование методов серологических исследований в медицинской практике

Методы С. и. непрерывно совершенствуются в направлении повышения чувствительности и универсальности использования. Изначально серол. диагностика основывалась на выявлении антител. С появлением в середине 20 в. реакций иммунофлюоресценции и пассивной гемагглютинации, обладающих большей чувствительностью, появилась возможность обнаруживать не только антитела, но и антиген непосредственно в материале от больных. Энзим-иммунологический и радиоиммунологический методы, по чувствительности на 2—3 порядка превышающие иммунофлюоресценцию и пассивную гемагглютинацию, приближаются к методам биол. обнаружения бактерий и вирусов. Область их применения для обнаружения как антигенов, так и антител теоретически не ограничена.

Серодиагностика инф. болезней базируется на появлении антител к выделенному или предполагаемому возбудителю независимо от того, был ли обнаружен возбудитель в острой стадии болезни. Исследуют пары сывороток крови, взятых в начале болезни и 2—3 нед. спустя. Прирост антител во второй сыворотке крови не менее чем в 4 раза по сравнению с первой является диагностически значимым. Имеет также значение, каким классом иммуноглобулинов представлены антитела. IgM-антитела обнаруживают в конце острого периода болезни и в ранней стадии реконвалесценции. IgG-антитела появляются в более поздние сроки реконвалесценции и циркулируют долго. Если у женщины в первом триместре беременности обнаруживают IgM-антитела к вирусу краснухи, то это служит основанием для прерывания беременности, т. к. в этот период плод особенно чувствителен к вирусу. При разных инф. болезнях избирательно используют наиболее специфические и удобные в исполнении методы.

Серологические исследования широко применяют в эпидемиологии. Систематический сбор и исследование образцов крови различных групп населения позволяют уяснить контакты населения с источником возбудителей инф. болезней. Изучение уровня коллективного иммунитета позволяет выявлять группы повышенного риска и планировать прививочные мероприятия, изучать географическое распространение инфекций. С. и. различных возрастных групп населения позволили, напр., ретроспективно выявить циркуляцию разных вариантов вируса гриппа в определенные периоды времени.

Серологические исследования имеют большое значение в изучении наследственных болезней (см.) и аутоиммунных болезней, сопровождающихся появлением ткане- и органоспецифических антител, разрушающих соответствующие клетки-мишени, а также в онкологии для обнаружения опухолевых антигенов. Так, иммунодиагностика рака печени основана на определении в сыворотке крови больных альфа-фетопротеина и других эмбриональных антигенов методом иммунодиффузии и радиоиммунологическим методом.

Значительный прогресс науки в изучении тонкой антигенной структуры клеточных антигенов, антигенов бактерий и вирусов достигается благодаря применению в серол. реакциях моноклональных антител, к-рые можно получать к отдельным детерминантам антигена.

См. также иммунодиагностика.

Библиография: Методы исследований в иммунологии, под ред. И. Лефковитса и Б. Перниса, пер. с англ., М., 1981; Руководство по иммунологии, под ред. О. Е. Вязова и Ш. X. Ходжаева, М., 1973; Руководство по клинической лабораторной диагностике, под ред. В. В. Меньшикова, М., 1982; Immunology, ed. by J.-F. Bach, N. Y., 1978.

Что такое серология

Раздел иммунологии, который занимается изучением взаимодействия антигенов (Аг) с антителами (Ат) сыворотки крови, называется серологией. Исследования могут проводить в пробирке с использованием биологического материала пациента или в организме лабораторных животных после их заражения. При проникновении в организм человека вирусных, инфекционных, паразитарных возбудителей иммунная система синтезирует против них антитела (белковые соединения). Возбудители заболеваний продуцируют антигены (чужеродное вещество).

Серологические исследования направлены на выявление антигенов, антител, которые точно укажут на наличие или отсутствие заболевания. По уровню белковых соединений можно определить фазу болезни, ее течение, эффективность лечебных мероприятий. С помощью серологии выявляют гормональные нарушения, аутоиммунные болезни, при которых собственные клетки организма воспринимаются как чужеродные.

Для борьбы с болезнетворными агентами организм выделяет определенные белки – для каждого возбудителя определенный тип. Белковые соединения и чужеродный материал подходят друг другу как ключ к замку, при их соединении образуется комплекс, который выпадает в осадок в пробирке. В результате в однородной сыворотке появляется осадок, хлопья или она мутнеет.

Важно! 

С помощью серологических исследований определяют группу крови, резус-фактор, подтверждают отцовство, выявляют источник инфекционных болезней при эпидемиях.

Антигены и антитела. Серологические реакции между антигенами и антителами.

Антигены – генетически чужеродные вещества, которые при введении в организм животного или человека вызывают специфический иммунный ответ — синтез антител, формирование сенсибилизированных Т-лимфоцитов, иммунологической  памяти или толерантности. Под чужеродными веществами понимаются химические структуры, которых нет в организме. Инородными для организма человека являются вирусы, микроорганизмы, а также клетки, ткани, органы животных и других людей. Антигены имеют несколько рецепторов для связи с антителами и способны вступать в реакцию с ними как в организме животного или человека (in vivo), так и вне организма – в пробирке (in vitro).

Антитела — высокомолекулярные белки глобулиновой фракции сыворотки крови. Антитела синтезируются под влиянием антигена и способны специфично реагировать (соединяться) с соответствующим антигеном. Все антитела имеют характерную структуру иммуноглобулинов; отличаются по иммунологическим, биологическим и физическим свойствам; и делятся на 5 классов – ІgG , ІgА, ІgМ, ІgD и ІgЕ. 

Цитомегаловирус (C в аббревиатуре ToRCH-инфекции)

Цитомегаловирус был обнаружен только в XX веке. Инфекция передается половым путем, с кровью, через слюну (например, при поцелуях), а также от матери к ребенку во время грудного вскармливания. В настоящее время считается, что около 80% женщин детородного возраста являются носителем этой инфекции.

В большинстве случаев цитамегаловирус находится в «спящем» состоянии. Иногда инфекция проявляется в виде обычной простуды, но чаще никаких симптомов заболевания не наблюдается. И только при значительном снижении иммунитета возникает угроза перехода заболевания в острую форму.

Для плода наибольшую опасность представляет первичное заражение цитамегаловирусом. Особенно опасно заразиться в первом триместре. Это может привести к недоразвитию или водянке головного мозга ребенка, желтухе, увеличению печени и селезенки, развитию пороков сердца и врожденных уродств.

Методы серологических исследований

Способов проведения диагностики множество, как и заболеваний, которые они выявляют. Наиболее значимые:

1. Агглютинация.
2. Преципитация
3. Гемагглютинация.
4. Торможение гемагглютинации.
5. Непрямая реакция Кумбса.
6. Коагглютинация.
7. Преципитация.
8. Двойная радиальная иммунодиффузия.
9. Реакция связывания комплемента (РСК).
10. Иммунофлюоресценция (РИФ).
11. Иммуноферментный метод (ИФА).
12. Нейтрализация.

Чаще всего в лабораториях применяют ИФА, РИФ, РСК, реакции агглютинации.

Иммунофлюоресцентный метод (РИФ)

Для проведения исследования необходим биологический материал пациента, люминесцирующая жидкость. Второй компонент содержит антитела к предполагаемому возбудителю заболевания, которые помечены флуоресцеинизотиоционатом.

Виды РИФ:

1. Прямой – материал пациента смешивают с мечеными антителами, если это срез ткани, обрабатывают его поверхность. Если возбудитель присутствует, образуется светящийся комплекс.
2. Непрямой – проводят в 2 этапа. На первом в сыворотку или другой материал добавляют немеченые (первые) антитела. На втором вводят меченые (вторые) антитела против первых.

Полученные комплексы исследуют под люминесцентным, оптическим микроскопом ручным способом или автоматическим с помощью микрочипового цитометра. Из-за флуоресцентного вещества комплексы при затемнении излучают зеленое свечение, яркость которого отмечают плюсами от 1 до 4. Чем меньше плюсов, тем меньше комплексов с возбудителем заболевания.

Иммуноферментный метод

Как и РИФ, основан на маркировке чужеродного материала или белковых иммунных компонентов. В качестве маркировочного вещества выступают различные ферменты, которые имеют высокую специфичность, умеренную каталитическую активность, стабильность при образовании комплексов. Методы ИФА: гомогенные, гетерогенные. При первых все реакции происходят в жидком растворе. При вторых реакции проводят при участии твердого носителя.

Суть ИФА заключается в образовании комплексов иммунных белков человека с чужеродными антигенами сначала в жидком растворе, затем на твердой фазе. Под ней подразумевают прикрепление антигенов, антител к стенкам лунок полистиролового микропланшета. То есть после смешивания материала пациента с антителами против возбудителя смесь переносят на поверхность с лунками, куда прикрепляются антитела, антигены. Дальше изучают состав материала.

Реакция связывания комплимента

Для исследования необходимы: кровь или другой материал пациента, сыворотка с антителами, комплимент. Сначала смешивают кровь с сывороткой – образуется комплекс. После добавляют комплимент, который связывается с комплексом. Если связи между антиген-антитело не образуется, то комплемент остается в свободном, несвязанном состоянии. Чтобы определить его состояние в исследуемой жидкости, добавляют гемолитическую смесь (эритроциты барана с гемолитической сывороткой). Если комплемент свободен, он соединяется с гемолитической смесью – реакция отрицательная, возбудитель не обнаружен.

Реакции, связанные с агглютинацией

Самые простые серологические реакции – с применением антибактериальной сыворотки. Исследуемую кровь пациента смешивают при комнатной температуре с различными сыворотками определенной концентрации. Результат оценивают по концентрации сыворотки, при которой произошла агглютинация. С помощью агглютинации определяют группу крови, резус-факторы.

Важно! 

Распространенным методом серологической диагностики являются реакции, основанные на феномене преципитации: иммуноэлектрофорез, иммунодиффузия и др.

Расшифровка серологического анализа

Данное лабораторное исследование показано пациентам при появлении трудностей дифференциальной диагностики различного рода инфекций. В данном случае только серологический анализ сможет определить тип возбудителя инфекции и помочь врачу определить диагноз заболевания. К тому же огромная польза данной методики отражается при подборе лекарственной терапии пациенту, потому что возбудители многих болезней сильно различаются своей чувствительностью к действию антибиотиков и иных лекарственных средств.

Благодаря серологическому исследованию можно без труда определить наличие у человека болезни, которая была вызвана попаданием в организм скрытой инфекции. Окончив процедуру сбора материала, лаборанты выполняют расшифровку показателей, позволяющих опытным врачам в полном объеме исследовать патологии, возникшие в организме. В случае отсутствия в крови антител у человека не развивается инфекционное заболевание. При этом результат анализа будет положительным. Но это редкий случай. Как правило, при наличии симптомов болезни серологический анализ служит доказательством наличия опасной патологии. В этом случае процесс дублируется. Изначально выявляют нахождение в организме мелких возбудителей инфекции. Далее по числу антител идентифицируют степень развития воспалительного процесса.

Нормой при осуществлении данного теста считается нулевое содержание антител. Значение всегда будет означать наличие в организме патологии. В связи с этим пациенту требуется прохождение дополнительных исследований для подтверждения поставленного диагноза.

Серологическое исследование крови

Серологический анализ – это метод определения антигенов или антител в сыворотке крови. Основан на взаимодействии антител, вырабатываемых организмом, с антигенами возбудителей заболеваний. Такое взаимодействие еще называют реакцией иммунитета.

Иммунологические методы диагностики:

• агглютинации – склеивание микробов антителами и выпадение их в осадок;
• преципитации – взаимодействие антител с растворимым антигеном;
• нейтрализации;
• связывания комплемента;
• использование меченых антител;

Как проводят серологическое исследование?

1. Агглютинация. К разведенной агглютинирующей сыворотке добавляют взвесь бактерий. В результате бактерии склеиваются антителами и выпадает хлопьевидный осадок. Таким образом определяют группы крови, резус-фактор, беременность, чувствительность к лекарственным препаратам и гормонам.
2. Преципитация. На слой сыворотки в пробирке наслаивают растворимый антиген. При возникновении реакции на границе слоев образуется преципитатное кольцо. Применяется для диагностики сибирской язвы, менингококка, чумы и др.
3. Нейтрализация. Взвесь микроорганизмов, вирусов или их токсинов вносится в культуру клеток, затем туда же добавляется иммунная сыворотка. При отсутствии повреждающего воздействия на клетки судят о нейтрализующем действии сыворотки. Эта реакция позволяет определять совместимость тканей при трансплантации органов.
4. Связывание комплемента. Проводится в две стадии. К сыворотке крови добавляют антиген и комплемент. При наличии в ней специфических антител создается комплекс «антиген-антитело-комплемент». На второй стадии добавляется гемолитическая система. При положительной реакции, гемолиза (разрушения) эритроцитов системы не происходит. Это единственный способ диагностирования скрытой формы сифилиса.
5. Иммунофлюоресценция. Взятые мазки или образцы тканей окрашивают флюорохромом, а затем исследуют под люминисцентным микроскопом. Присутствующие возбудители светятся, как светлячки. Так диагностируют бешенство и большинство урогенитальных инфекций.

Кому нужен серологический анализ?

Серологический анализ крови в обязательном порядке делают беременным и донорам, а также при подготовке к трансплантации органов. Это — основной способ диагностики большинства половых заболеваний, кишечных инфекций, гепатита. При аутоиммунных заболеваниях (красная волчанка, сахарный диабет, ревматоидный артрит) антитела вырабатываются организмом к своим собственным тканям. И серологическое исследование – единственный метод, позволяющий их обнаружить. 

Подготовка к анализу

Кровь берется натощак из локтевой вены. Никакой предварительной подготовки не требуется. Не рекомендуется сдавать кровь на серологию после флюорографии, рентгена, физиотерапевтических процедур.

Подготовка к исследованию

Чаще биологическим материалом служит кровь, реже слюна, кал, моча, срезы тканей, альвеолярные смывы, спинномозговая, амниотическая жидкости. Серологические исследования включают в себя множество методов выявления возбудителей, от этого зависят определенные правила подготовки. Общие рекомендации перед серологическими тестами:

• последний прием пищи за 9-12 часов;
• за 24 часа ограничить употребление жирной, жареной, соленой, острой пищи, алкогольных напитков;
• в день сдачи крови нельзя есть, разрешено пить обычную негазированную воду;
• по возможности не курить за 10 часов до сдачи;
• прекратить прием любых лекарственных препаратов, в том числе витаминов. Если медикаменты назначены на постоянной основе и прекратить прием нельзя, предупредить врача;
• за 24 часа избегать стресса, исключить физические нагрузки.

Желательно, чтобы перед сдачей человек находился в спокойном состоянии, так как при любых эмоциональных проявлениях в кровь выделяются гормональные вещества, белки (кортизол, адреналин, норадреналин и др.). Если назначены инструментальные методы диагностики, то в первую очередь сдают кровь, чтобы последующие обследования не повлияли на результат анализа.

Иммуноферментный анализ крови

Одной из популярных разновидностей серологических исследований считается иммуноферментный анализ, осуществляемый для эффективного контроля над числом антигенов и антител в сыворотке крови человека. К тому же с помощью данного метода возможно определение содержания гормонов, иммунологических комплексов и иных биологических компонентов.

При проникновении в ткань и жизненно важные органы человека биоорганических веществ иммунитет не допускает их влияния на здоровье за счет антител и иммуноглобулинов. В результате их воздействия в организме образуется комплекс антиген-антитело

Только его всесторонний анализ будет являться важной составляющей иммуноферментного метода

В качестве основного материала, необходимого для выполнения исследования, выступает кровь пациента. В некоторых случаях, чтобы распознать вид заболевания или подобрать терапию, для анализа берут цереброспинальную и амниотическую жидкость. Иммуноферментный анализ крови как составляющее звено серологии основывается на детальном изучении кровяных молекул и иммуноглобулинов. Их особенностью является способность к обнаружению и уничтожению возбудителей инфекций совместно с определенным антигеном.

Недостатков метода немного: возможно получение ложноотрицательного результата, что требует в дальнейшем повторного тестирования.

Перед тем как сдавать какой-либо лабораторный анализ, необходимо соблюдать правила подготовки. Сбор материала должен проводиться исключительно в санитарных условиях. К тому же необходимо не допустить попадания в кровь постороннего вещества. Важным условием каждого анализа на инфекции является сдача крови исключительно натощак. При этом за день до сдачи анализа не рекомендуется употреблять жирную и острую пищу, алкогольную продукцию и сладкие напитки. Дополнительно необходимо избегать стрессовых ситуаций и любых физических нагрузок. В любом случае перед тем, как принять решение о сдаче крови на исследование, нужно пройти медицинское обследование у лечащего врача.

Услышав жалобы пациента, доктор сможет порекомендовать целесообразность сдачи серологического анализа крови.

Функциональная диагностика в неврологии

Электроэнцефалография (ЭЭГ)

• Стоимость: 2 800 руб.
• Продолжительность: 10-20 минут
• Госпитализация: Амбулаторно

Подробнее

Электроэнцефалография (ЭЭГ) – основной метод диагностики в . Он состоит в регистрации электрических потенциалов мозга. Для проведения обследования необходимо закрепить на голове электроды. В среднем проведение исследование занимает не более 20 минут. ЭЭГ применяется в диагностике практически всех известных функциональных патологий головного мозга – от опухолей и сосудистых заболеваний до эпилепсии. Применяется метод и у детей – для оценки состояния коры головного мозга. В клинике ЦЭЛТ проводят ЭЭГ как по показаниям, так и в рамках медицинской комиссии для водителей.

Эхоэнцефалограмма (ЭхоЭГ) – еще один метод исследования головного мозга. Отличие в том, что это ультразвуковое обследование. Позволяет обнаружить патологические изменения не только коры или срединных структур, но также и в труднодоступном околокостном пространстве.

В ЦЭЛТ вы можете провести функциональную диагностику

• Электроэнцефалография (ЭЭГ) — 2 800
• Эхоэнцефалография (ЭхоЭГ) — 1 200

Записаться на прием

Электронейромиография (ЭНМГ)

• Стоимость: 8 400 руб.
• Продолжительность: 30-40 минут
• Госпитализация: амбулаторно

Подробнее

Электронейромиография (ЭНМГ) и электромиография (ЭМГ) – метод электрофизиологического исследования, позволяющей оценить полноценность нервно-мышечной передачи, степени электрической возбудимости мышц и функциональное состоянии периферического нерва, то есть определить скорость прохождения нервного импульса, объективно оценивающий функцию периферических нервов и мышц. Метод позволяет установить причину нарушения взаимодействие периферического нерва и скелетной мышцы.

Регистрация акустических стволовых вызванных потенциалов (АСВП)

• Стоимость: 3 000 руб.
• Продолжительность: 30 — 60 минут
• Госпитализация: амбулаторно или до 2-ух часов в стационаре

Подробнее

Регистрация вызванных потенциалов – группа методов фиксации этой самой активности, возникающей в ответ на целенаправленное раздражение каких-либо рецепторов: зрительных (ЗВП), слуховых (или акустических – АСВП), кожных симпатических (КСВП), соматосенсорных (ССВП), когнитивных и других. Помогает оценить функциональное состояние и определенных центров в головном мозге, и состояние проводящих путей.

Показания к проведению серологического анализа

Серологические анализы крови назначают для диагностики различных инфекций:

• вирусные — корь, ЦМВ, гепатит В и С и другие;
• бактериальные — например, боррелиоз или брюшной тиф;
• паразитарные — например, токсоплазмоз или токсокароз.

Чаще всего серология применяется для выявления вирусных инфекций, потому что выделить вирусы из организма напрямую очень сложно. Прямые методы используются только в вирусологии с научными целями, а для бытовой диагностики не применяются.

При менингитах используют серологический анализ ликвора, спинномозговой жидкости. Если менингит вызван бактериями или вирусами, в ликворе появятся антитела к этим возбудителям.

Комплексы серологических реакций показаны не только при наличии явных клинических признаков болезни. Обследование применяют для выявления носителей различных инфекций. Например, при трудоустройстве нужно сдавать:

• серологическое исследование крови на брюшной тиф;
• тесты для определения маркеров вирусных гепатитов;
• анализ крови на сифилис.

Эти обследования показаны не для всех профессий, а для так называемых декретированных групп. Сюда входят медицинские работники, педагоги, работники торговли и пищевой промышленности.

Серологические тесты используют для оценки напряженности иммунитета к различным инфекциям у переболевших или привитых людей. Если уровень антител после вакцинации снижается менее определенного значения, прививку нужно повторять.